pcr實驗室用的隔墻板

pcr實驗室用的隔墻板
1、主體結構:
目前實驗室的主體多為彩鋼板、鋁合金型材。室內所有陰角、陽角均采用鋁合金R50內圓角鋁,從而解決容易污染、積塵、不易清掃等問題。并且彩鋼板結構牢固,線條簡明,美觀大方,密封性好。
2、標準的四區(qū)分隔和氣壓調節(jié):
將PCR過程分成試劑準備、標本制備和PCR擴增區(qū)及產物分析檢測區(qū)四個獨立的實驗區(qū)。整個區(qū)域有一個整體緩沖走廊。每個獨立實驗區(qū)設置有緩沖區(qū),同時各區(qū)通過氣壓調節(jié),使整個PCR實驗過程中試劑和標本免受氣溶膠的污染并降低擴增產物對人員和環(huán)境的污染。
3、消毒:
在四個實驗區(qū)和四個緩沖區(qū)頂部以及傳送窗內部安裝有紫外燈,供消毒用。
在試劑準備區(qū)和標本制備區(qū)還設置移動紫外線燈,對實驗桌進行局部消毒。
4、機械連鎖不銹鋼傳遞窗:
試劑和標本通過機械連鎖不銹鋼(不建議使用電子連鎖方式)傳遞窗傳遞,保證試劑和標本在傳遞過程中不受污染(人物分流)。
5、地面
地面建議使用PVC卷材地面或自流坪地面,整體性好。便于進行清掃,耐腐蝕。沒有條件的也可采用水磨石地面,或大塊的瓷磚(至少800mm×800mm)接縫需要小于2mm。
6、照明
燈具要選用凈化燈具,能達到便于清洗、不積塵的特點。
另外:
?PCR實驗室可分為兩個大的功能工作區(qū)域:核酸擴增前區(qū)和核酸擴增后區(qū)。核算擴增前區(qū)包括試劑準備間和樣本制備間,這個兩房間各自獨立,不能出現空氣互通,這兩個房間相對外界氣壓呈正壓狀態(tài)。核酸擴增后區(qū)包括擴增區(qū)和產物分析區(qū),使用實時熒光PCR儀、HIV病毒載量測定儀的PCR實驗室,這個兩區(qū)域可以合并為一個房間。這個區(qū)域如果是分開兩個房間,這兩個房間也必須是各自獨立,不能出現空氣互通。核算擴增后區(qū)對外界氣壓呈負壓狀態(tài)。
?PCR實驗室根據使用儀器的功能合理設置各個工作區(qū)域,如采用聚合酶聯反應:則設置試劑儲存和準備區(qū)、標本制備區(qū)、擴增區(qū)、擴增產物分析區(qū)四個單獨的工作區(qū)域,這是最常用的分區(qū)方式。樣品需要粉碎處理的,還需增設樣品粉碎區(qū);若使用實時熒光PCR法:基因擴增區(qū)、基因產物分析區(qū)可以合并在一個房間內;采用標本處理、核酸提取及擴增檢測為一體的全自動化PCR分析儀,則標本制備區(qū)、擴增區(qū)、擴增產物分析區(qū)可合并為一個區(qū)域,因此PCR實驗室原則上設置五個區(qū)或四個區(qū)或三個區(qū)或二個單獨的工作區(qū)。
?核酸擴增前區(qū)和核酸擴增后區(qū)可設在一個房間內,但必須在滿足下列要求的前提下:
核酸擴增前區(qū)實驗室內設置兩個不同位置的實驗區(qū),試劑配置在超凈工作臺中操作,樣品處理在生物安全柜內操作。
在核酸擴增后區(qū)使用全封閉的擴增和檢測系統,如實時熒光PCR儀等。
每個實驗人員使用各自的試劑、耗材、移液器和盛放污染物的盛器。
在實驗前后對操作區(qū)域和共享器具進行清潔及消毒。
各區(qū)域的試劑、器具、儀器和設備為該區(qū)專用,不得交叉使用。
三、空氣流與壓差要求
PCR實驗室的空氣流向必須嚴格按照試劑儲存和準備區(qū)→標本制備區(qū)→擴增區(qū)→擴增產物分析區(qū)空氣壓力逐漸遞減方式進行,防止擴增產物順空氣氣流進入擴增前的區(qū)域。風速流向不得混亂。
為了保證房間內的壓差和避免污染,應在空調面板處寫清楚送風機和排風機的開啟順序和關閉順序,先后順序不得混亂。
空氣潔凈級別不同的相鄰房間之間的靜壓差應大于5帕,潔凈室(區(qū))與室外大氣的靜壓差應大于10帕,應配備監(jiān)測靜壓差的設備,并定期監(jiān)控。
一般情況下,試劑配制室及樣品處理室宜呈微正壓,以防外界含核酸氣溶膠的空氣進入,造成污染;可以通過控制進風風量大于排風風量達到正壓效果。
核酸擴增室及產物分析室應呈微負壓,以防含核酸的氣溶膠擴散出去污染試劑與樣品,可以通過控制排風風量大于進風風量達到負壓效果。

在理想情況下,PCR實驗室緩沖間內,可設置正壓,使室內空氣不流向室外,室外空氣不流向室內。 PCR實驗室進風由原有中央空調控制的要求將中央空調風口安裝到指定定點。
四、實驗室面積及設備間距
一般來說各房間的面積沒有嚴格要求,只需能放置所需儀器設備,并且便于人員操作即可,但是有生物安全柜的房間面積不能小于10平米,并且每增加一臺生物安全柜,房間就要增加10平米。
各實驗室緩沖間的面積一般為1300*(1300或1500)mm為宜,并且緩沖間的面積不能大于實驗室房間面積的1/8。
在做平面設計的時候,首先要考慮的因素是就是“安全”,實驗室是最易發(fā)生爆炸、火災、毒氣泄露等的場所。我們在做平面設計的時候,應盡量地要保持實驗室的通風流暢、逃生通道暢通。根據國際人體工程學的標準。我們做如下的劃分以供參照:
實驗臺與實驗臺通道劃分標準(通道間隔用L表示)
L>500mm時,一邊可站人操作;
L>800mm時,一邊可坐人操作;
L>1200mm時,一邊可坐人,一邊可站人,中間不可過人;
L>1500mm時,兩邊可坐人,中間可過人;
L>1800mm時,兩邊可坐人,中間可過人可過儀器

天平臺、儀器臺不宜離墻太近,離墻400mm為宜。為了在工作發(fā)生危險時易于疏散,實驗臺間的過道應全部通向走廊。另:實驗室建筑層高宜為3.7米-4.0米為宜,凈高宜為2.7米-2.8米,有潔凈度、壓力梯度、恒溫恒濕等特殊要求的實驗室凈高宜為2.5米-2.7米(不包括吊頂);實驗室走廊凈寬宜為2.5米-3.0米.普通實驗室雙門寬以1.1米-1.5米(不對稱對開門)為宜,單門寬以0.8米-0.9米為宜。
五、潔凈裝修要求
潔凈室(區(qū))的內表面應平整光滑、無裂縫、接口嚴密、無顆粒物脫落,并能耐受清洗和消毒,墻壁與地面的交界處宜成弧形或采取其他措施,以減少灰塵積聚和便于清潔。
潔凈室(區(qū))內各種管道、燈具、風口以及其他公用設施,在設計和安裝時應考慮使用中避免出現不易清潔的部位。
潔凈室(區(qū))的窗戶、天棚及進入室內的管道、風口、燈具與墻壁或天棚的連接部位均應密封。
六、工作服要求
在凈化車間內工作的人員應穿著符合要求的工作服。工作服的選材、式樣及穿戴方式應與生產操作和空氣潔凈度級別要求相適應,并不得混用。潔凈工作服的質地應光滑、不產生靜電、不脫落纖維和顆粒性物質。無菌工作服必須包蓋全部毛發(fā)、胡須及腳部,并能阻留人體脫落物。不同空氣潔凈度級別使用的工作服應當分別清洗、整理,必要時消毒或滅菌。工作服洗滌、滅菌時不應帶入附加的顆粒物質。工作服應制定清洗周期。
進入各個區(qū)域必須嚴格按照單一方向進行,不同的工作區(qū)域使用不同的工作服(例如不同的顏色)。工作人員離開時,不得將工作服帶出。
實驗室應建立、執(zhí)行人員進出潔凈區(qū)的清潔程序和管理制度,人員清潔程序合理。
七、人流路徑與物流路徑
進入實驗室區(qū)域工作人員應該按照以下路徑:
公共清潔區(qū)——更衣間(更換潔凈服)——緩沖間——污染實驗區(qū)
工作人員退出實驗室的路徑為:
污染試驗區(qū)——緩沖間——淋浴間(有條件的可設置)——更衣間——公共清潔區(qū)
所有的物品進入實驗區(qū)必須經過雙扉互鎖傳遞窗,利用傳遞窗消毒后才可進入,實驗室內所有物品的也必須經過傳遞窗才可以傳遞到實驗室以外的清潔公共區(qū)。
八、門的開啟方向
實驗室建筑層高宜為3.7米-4.0米為宜,PCR實驗室凈高宜為2.5米-2.7米(不包括吊頂);實驗室走廊凈寬宜為2.5米-3.0米.普通實驗室雙門寬以1.1米-1.5米(不對稱對開門)為宜,單門寬以0.8米-0.9米為宜。
一般實驗室門主要向里開,但如有危險的房間,房門應朝外開,房門材質**選擇壓力玻璃。
有壓差梯度的房間,門的開啟方向應朝向正壓方向一側開啟;
考慮到消防安全,對于那些主要逃生門的開啟方向應朝向清潔區(qū)方向開啟。
九、基本儀器設備考慮
(1)試劑貯存和準備區(qū)
該實驗區(qū)主要進行的操作為貯存試劑的制備、試劑的分裝和主反應混合液的制備。試劑和用于樣品制作的材料應直接運送至該區(qū),不得經過其他區(qū)域。試劑原材料必須貯存在本區(qū)內,并在本區(qū)內制備成所需的貯存試劑。對與氣流壓力的控制,本區(qū)應對外界保持微正壓。
試劑準備區(qū)儀器設備主要應有加樣器、冰箱、天平、低速離心機、混勻器、可移動紫外燈等??墒褂贸瑑艄ぷ髋_作為試劑配制操作臺面。
(2)標本制備區(qū)
該區(qū)域主要進行的操作為樣本的保存、核酸(RNA、DNA)提取、貯存及其加入至擴增反應管和測定DNA的合成。本區(qū)的壓力梯度要求為:相對于鄰近區(qū)域為正壓,以避免從鄰近區(qū)進入本區(qū)的氣溶膠污染。另外,由于在加樣操作中可能會發(fā)生氣溶膠所致的污染,所以應避免在本區(qū)內不必要的走動。
標本制備區(qū)儀器設備主要應有生物安全柜(**為B2,可避免提取核酸在柜內反復循環(huán),造成標本間交叉“污染”,出現假陽性結果。此外還應配備加樣器、臺式高速離心機(冷凍及常溫)、臺式低速離心機、恒溫設備(水浴和/或干浴儀)、冰箱、混勻器和可移動紫外燈等。
(3)擴增和擴增產物分析區(qū)
該區(qū)域主要進行的操作為DNA擴增和擴增片段的測定。此外,已制備的DNA模板(來自樣本制備區(qū))的加入和主反應混合液(來自試劑貯存和制備區(qū))制備成反應混合液等也可在本區(qū)內進行。本區(qū)的壓力梯度要求為:相對于鄰近區(qū)域為負壓,以避免氣溶膠從本區(qū)漏出。為避免氣溶膠所致的污染,應盡量減少在本區(qū)內的不必要的走動。個別操作如加樣等應在超凈臺內進行。
擴增區(qū)主要儀器就是核酸擴增熱循環(huán)儀(PCR儀,實時熒光或普通的)。熱循環(huán)儀的電源應專用,并配備一個穩(wěn)壓電源或UPS,以防止由于電壓的波動對擴增測定的影響。此外,根據工作需要,還可配備加樣器、超凈臺等。

產物分析區(qū):本區(qū)所使用的儀器設備可能有加樣器、電泳儀(槽)、電轉印儀、雜交爐或雜交箱、水浴箱、DNA測序儀、酶標儀和洗板機等。

基因擴增實驗室緩沖間要有什么設施
1、主體結構:
目前實驗室主體彩鋼板、鋁合金型材室內所陰角、陽角均采用鋁合金R50內圓角鋁解決容易污染、積塵、易清掃等問題并且彩鋼板結構牢固線條簡明美觀密封性
2、標準四區(qū)隔氣壓調節(jié):
PCR程試劑準備、標本制備PCR擴增區(qū)及產物析檢測區(qū)四獨立實驗區(qū)整區(qū)域整體緩沖走廊每獨立實驗區(qū)設置緩沖區(qū)同各區(qū)通氣壓調節(jié)使整PCR實驗程試劑標本免受氣溶膠污染并降低擴增產物員環(huán)境污染
3、消毒:
四實驗區(qū)四緩沖區(qū)頂部及傳送窗內部安裝紫外燈供消毒用
試劑準備區(qū)標本制備區(qū)設置移紫外線燈實驗桌進行局部消毒
4、機械連鎖銹鋼傳遞窗:
試劑標本通機械連鎖銹鋼(建議使用電連鎖式)傳遞窗傳遞保證試劑標本傳遞程受污染(物流)
5、面
面建議使用PVC卷材面或自流坪面整體性便于進行清掃耐腐蝕沒條件采用水磨石面或塊瓷磚(至少800mm×800mm)接縫需要于2mm
6、照明
燈具要選用凈化燈具能達便于清洗、積塵特點
另外:
?PCR實驗室兩功能工作區(qū)域:核酸擴增前區(qū)核酸擴增區(qū)核算擴增前區(qū)包括試劑準備間本制備間兩房間各自獨立能現空氣互通兩房間相外界氣壓呈壓狀態(tài)核酸擴增區(qū)包括擴增區(qū)產物析區(qū)使用實熒光PCR儀、HIV病毒載量測定儀PCR實驗室兩區(qū)域合并房間區(qū)域兩房間兩房間必須各自獨立能現空氣互通核算擴增區(qū)外界氣壓呈負壓狀態(tài)
?PCR實驗室根據使用儀器功能合理設置各工作區(qū)域采用聚合酶聯反應:則設置試劑儲存準備區(qū)、標本制備區(qū)、擴增區(qū)、擴增產物析區(qū)四單獨工作區(qū)域用區(qū)式品需要粉碎處理需增設品粉碎區(qū);若使用實熒光PCR:基擴增區(qū)、基產物析區(qū)合并房間內;采用標本處理、核酸提取及擴增檢測體全自化PCR析儀則標本制備區(qū)、擴增區(qū)、擴增產物析區(qū)合并區(qū)域PCR實驗室原則設置五區(qū)或四區(qū)或三區(qū)或二單獨工作區(qū)
?核酸擴增前區(qū)核酸擴增區(qū)設房間內必須滿足列要求前提:
核酸擴增前區(qū)實驗室內設置兩同位置實驗區(qū)試劑配置超凈工作臺操作品處理物安全柜內操作
核酸擴增區(qū)使用全封閉擴增檢測系統實熒光PCR儀等
每實驗員使用各自試劑、耗材、移液器盛放污染物盛器
實驗前操作區(qū)域共享器具進行清潔及消毒
各區(qū)域試劑、器具、儀器設備該區(qū)專用交叉使用
三、空氣流與壓差要求
PCR實驗室空氣流向必須嚴格按照試劑儲存準備區(qū)→標本制備區(qū)→擴增區(qū)→擴增產物析區(qū)空氣壓力逐漸遞減式進行防止擴增產物順空氣氣流進入擴增前區(qū)域風速流向混亂
保證房間內壓差避免污染應空調面板處寫清楚送風機排風機啟順序關閉順序先順序混亂
空氣潔凈級別同相鄰房間間靜壓差應于5帕潔凈室(區(qū))與室外氣靜壓差應于10帕應配備監(jiān)測靜壓差設備并定期監(jiān)控
般情況試劑配制室及品處理室宜呈微壓防外界含核酸氣溶膠空氣進入造污染;通控制進風風量于排風風量達壓效
核酸擴增室及產物析室應呈微負壓防含核酸氣溶膠擴散污染試劑與品通控制排風風量于進風風量達負壓效

理想情況PCR實驗室緩沖間內設置壓使室內空氣流向室外室外空氣流向室內 PCR實驗室進風由原央空調控制要求央空調風口安裝指定定點
四、實驗室面積及設備間距
般說各房間面積沒嚴格要求需能放置所需儀器設備并且便于員操作即物安全柜房間面積能于10平米并且每增加臺物安全柜房間要增加10平米
各實驗室緩沖間面積般1300*(1300或1500)mm宜并且緩沖間面積能于實驗室房間面積1/8
做平面設計候首先要考慮素安全實驗室易發(fā)爆炸、火災、毒氣泄露等場所我做平面設計候應盡量要保持實驗室通風流暢、逃通道暢通根據際體工程標準我做劃供參照:
實驗臺與實驗臺通道劃標準(通道間隔用L表示)
L>500mm邊站操作;
L>800mm邊坐操作;
L>1200mm邊坐邊站間;
L>1500mm兩邊坐間;
L>1800mm兩邊坐間儀器

平臺、儀器臺宜離墻太近離墻400mm宜工作發(fā)危險易于疏散實驗臺間道應全部通向走廊另:實驗室建筑層高宜3.7米-4.0米宜凈高宜2.7米-2.8米潔凈度、壓力梯度、恒溫恒濕等特殊要求實驗室凈高宜2.5米-2.7米(包括吊頂);實驗室走廊凈寬宜2.5米-3.0米.普通實驗室雙門寬1.1米-1.5米(稱門)宜,單門寬0.8米-0.9米宜
五、潔凈裝修要求
潔凈室(區(qū))內表面應平整光滑、裂縫、接口嚴密、顆粒物脫落并能耐受清洗消毒墻壁與面交界處宜弧形或采取其措施減少灰塵積聚便于清潔
潔凈室(區(qū))內各種管道、燈具、風口及其公用設施設計安裝應考慮使用避免現易清潔部位
潔凈室(區(qū))窗戶、棚及進入室內管道、風口、燈具與墻壁或棚連接部位均應密封
六、工作服要求
凈化車間內工作員應穿著符合要求工作服工作服選材、式及穿戴式應與產操作空氣潔凈度級別要求相適應并混用潔凈工作服質應光滑、產靜電、脫落纖維顆粒性物質菌工作服必須包蓋全部毛發(fā)、胡須及腳部并能阻留體脫落物同空氣潔凈度級別使用工作服應別清洗、整理必要消毒或滅菌工作服洗滌、滅菌應帶入附加顆粒物質工作服應制定清洗周期
進入各區(qū)域必須嚴格按照單向進行同工作區(qū)域使用同工作服(例同顏色)工作員離工作服帶
實驗室應建立、執(zhí)行員進潔凈區(qū)清潔程序管理制度員清潔程序合理
七、流路徑與物流路徑
進入實驗室區(qū)域工作員應該按照路徑:
公共清潔區(qū)——更衣間(更換潔凈服)——緩沖間——污染實驗區(qū)
工作員退實驗室路徑:
污染試驗區(qū)——緩沖間——淋浴間(條件設置)——更衣間——公共清潔區(qū)
所物品進入實驗區(qū)必須經雙扉互鎖傳遞窗利用傳遞窗消毒才進入實驗室內所物品必須經傳遞窗才傳遞實驗室外清潔公共區(qū)
八、門啟向
實驗室建筑層高宜3.7米-4.0米宜PCR實驗室凈高宜2.5米-2.7米(包括吊頂);實驗室走廊凈寬宜2.5米-3.0米.普通實驗室雙門寬1.1米-1.5米(稱門)宜,單門寬0.8米-0.9米宜
般實驗室門主要向危險房間房門應朝外房門材質選擇壓力玻璃
壓差梯度房間門啟向應朝向壓向側啟;
考慮消防安全于些主要逃門啟向應朝向清潔區(qū)向啟
九、基本儀器設備考慮
(1)試劑貯存準備區(qū)
該實驗區(qū)主要進行操作貯存試劑制備、試劑裝主反應混合液制備試劑用于品制作材料應直接運送至該區(qū)經其區(qū)域試劑原材料必須貯存本區(qū)內并本區(qū)內制備所需貯存試劑與氣流壓力控制本區(qū)應外界保持微壓
試劑準備區(qū)儀器設備主要應加器、冰箱、平、低速離機、混勻器、移紫外燈等使用超凈工作臺作試劑配制操作臺面
(2)標本制備區(qū)
該區(qū)域主要進行操作本保存、核酸(RNA、DNA)提取、貯存及其加入至擴增反應管測定DNA合本區(qū)壓力梯度要求:相于鄰近區(qū)域壓避免鄰近區(qū)進入本區(qū)氣溶膠污染另外由于加操作能發(fā)氣溶膠所致污染所應避免本區(qū)內必要走
標本制備區(qū)儀器設備主要應物安全柜(B2避免提取核酸柜內反復循環(huán)造標本間交叉污染現假陽性結外應配備加器、臺式高速離機(冷凍及溫)、臺式低速離機、恒溫設備(水浴/或干浴儀)、冰箱、混勻器移紫外燈等
(3)擴增擴增產物析區(qū)
該區(qū)域主要進行操作DNA擴增擴增片段測定外已制備DNA模板(自本制備區(qū))加入主反應混合液(自試劑貯存制備區(qū))制備反應混合液等本區(qū)內進行本區(qū)壓力梯度要求:相于鄰近區(qū)域負壓避免氣溶膠本區(qū)漏避免氣溶膠所致污染應盡量減少本區(qū)內必要走別操作加等應超凈臺內進行
擴增區(qū)主要儀器核酸擴增熱循環(huán)儀(PCR儀實熒光或普通)熱循環(huán)儀電源應專用并配備穩(wěn)壓電源或UPS防止由于電壓波擴增測定影響外根據工作需要配備加器、超凈臺等

產物析區(qū):本區(qū)所使用儀器設備能加器、電泳儀(槽)、電轉印儀、雜交爐或雜交箱、水浴箱、DNA測序儀、酶標儀洗板機等

我在分子生物學實驗室經常做PCR/qPCR實驗,請問有可拆分的96孔PCR反應板嗎?這樣我就可以節(jié)省不少費用了

北京中生提供英國產的break-A-Way,96孔可拆分PCR反應板、8個可拆分的微孔組成一孔條,12個孔條組成一塊板。不是廣告哦,網上搜的。

如何建立實驗室?檢測實驗室怎么建設?

第三方檢測實驗室建設要求:

1、場所要求:

實驗室建設項目不得有干擾,配置專用的無菌室、樣品室、天平室、純水制備間、樣品處理室、固體樣品制備間、辦公室等。

2、通風空調系統

實驗室整棟大樓可配置中央空調系統,中央空調系統可進行分區(qū),分時段的模塊管理。中央管道布局應根據實驗室通排風管道的設計,避免施工交錯重疊。

3、供氣系統

供氣系統的安全很重要,有條件的可配置獨立的氣瓶間,1是設置泄露報警、緊急切斷和強排風等裝置;2是為保證氣壓的穩(wěn)定性,需進行多級減壓供氣,設置氣路吹掃、排空等。

4、電氣系統

電氣分為2個方面,分別是強電和弱點:

強電:

根據功能間、樓層、整棟大樓統計,每個獨立的儀器間配備房間終端配電箱,不得與其他插座串聯;

配備UPS(不間斷電源),根據實驗室設備用電參數,確定不間斷電源功率及電流參數;

地面電插具有一定程度的防水,電插位置應靠近所供電儀器,減少地面走線。

弱電:

配備多個網絡通訊端口和電話接口,在主要通道上安裝監(jiān)控等方便管理。

5、實驗室家具

配備實驗室家具,例如實驗邊臺、實驗中央臺、高柜、吊柜等常備的家具,實驗室家具要符合人體工學,具有耐腐蝕耐酸堿等特點,可根據實際的采購需求,選擇材質、數量、顏色等參數。

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